Người Nhện có được sức mạnh loài nhện từ sau khi bị một con nhện cắn, tuy nó chỉ là giống nhện nhà thông thường (Achaearanea tepidariorum) nhưng đã bị chiếu xạ trước đó, có thể giả định rằng con nhện này đang trong quá trình đột biến do tiếp xúc thường xuyên với phóng xạ và đã đạt ngưỡng gây chết vào đúng cái ngày Peter tham dự buổi triển lãm sản phẩm. Những phức hợp enzym đột biến trong máu nhện truyền vào anh qua vết cắn khiến cả cơ thể anh biến đổi rõ rệt, tặng cho anh một sức mạnh phi thường, tốc độ, cơ thể rắn chắc và rất nhiều năng lực đặc trưng của loài nhện. Cũng như các năng lực siêu nhiên khác, sự hiệu quả của các kỹ năng của Người Nhện tùy thuộc ý đồ của tác giả và nội dung câu chuyện.

• Giác quan nhện: Người Nhện có một khả năng đặc biệt là linh cảm trước những mối nguy hiểm bất ngờ, với một cảm giác nhói đau sau gáy, liên hệ mật thiết với khả năng phản xạ cực tốt, anh dễ dàng tránh né mọi mối nguy hiểm một cách tự động, trừ khi anh muốn làm ngược lại. Nguồn gốc của khả năng đặc biệt này còn chưa rõ. Nó cảnh báo cho anh mọi mối nguy hiểm rình rập, từ những chiếc két sắt đang rơi, viên đạn bắn và những cú đấm của đối phương. Tuy không thể phân biệt rõ mối nguy hiểm sắp tới là gì, nhưng Người Nhện nhận thức được nó nguy hiểm đến chừng nào, và giúp anh dò tìm những kẻ địch đang ẩn nấp hay những vũ khí nguy hiểm. Trong những tình huống khẩn cấp, hay bị tấn công bất ngờ, sự báo động cũng rất dữ dội. Với một khoảng cách đủ xa, Người Nhện có thể né được cả đạn bắn. Kể cả khi đang ngủ hay bị ngất, anh có thể né tránh nguy hiểm như một phản xạ rất tự nhiên. Linh tính cũng mách bảo anh cẩn trọng với những chiếc máy ảnh, camera khi thay bộ trang phục Người Nhện. Linh cảm cũng có lúc cảnh báo về những người bình thường như dì May, Peter có thể chủ động ngắt những báo động như vậy, cũng có khi sự mệt mỏi hoặc đánh lạc hướng làm linh tính mất tác dụng. Phong cách chiến đấu của Người Nhện được hỗ trợ rất nhiều từ những linh tính này, khi có báo động, nồng độ adrenalin trong máu tăng vọt, cung cấp năng lượng bùng nổ để chiến đấu hoặc bỏ chạy. Kể cả khi không thể dùng mắt, linh tính của anh hoạt động như Radar thụ cảm của Daredevil phán đoán phương hướng của hiểm nguy như trong trận chiến với Vulture. Anh đã tạm mất khả năng này khi chiến đấu với bọn Spider-slayers, mãi đến phần Hòn đảo nhện mới khôi phục lại được.
• Leo tường: việc tiếp xúc với chất độc của con nhện đột biến đã gây ra một biến đổi lớn tại các "dấu vết ký ức" trong tiểu não của Peter, giúp anh có thể chủ động điều khiển dòng các lực hút tĩnh điện trong các nguyên tử giữa các bề mặt vật liệu, thắng được cả lực đẩy tương tác giữa các lớp vỏ electron của các nguyên tử với nhau, cho phép lực hút tĩnh điện chiếm ưu thế. Điều này cho phép toàn bộ cơ thể Người Nhện, đặc biệt là tay và chân, có khả năng bám dính với các đồ vật, đạt tới mức hút dính được vật nặng hàng tấn với mỗi ngón tay, giới hạn thực sự của khả năng này vẫn chưa được xác lập.
• Sức mạnh phi thường: Theo một số phân tích của người hâm mộ gần đây, có vẻ Peter chịu được một lực tầm khoảng 10000000 N, tức tầm 1000 tấn có lẻ. Anh dư sức nâng, ném một chiếc xe tải loại nhỏ dễ dàng như với một món đồ chơi. Sức mạnh này của anh thậm chí đã được chính Stan Lee, tác giả trong các tác phẩm truyện tranh của Marvel, công nhận là nếu anh không tự hạn chế bản thân để không gây rắc rối thì chỉ thua Hulk và Thor về độ cơ bắp. Anh chỉ dùng siêu năng lực cua mình đối phó với những đối thủ nguy hiểm, không một người bình thường nào có thể địch lại anh, một cái gõ nhẹ vào đầu có thể khiến người thường phải ngất xỉu. Trong Cuộc xâm lược bí mật, Người Nhện hạ knock-out một con khủng long bạo chúa Tyrannosaurus Rex chỉ với một cú đấm. Người Nhện chỉ cần nhún chân một cái là bay qua một tòa nhà vài tầng, khi tránh một chiếc xe lao tới, anh đã nhảy cao tới 30 feet (9,1m) theo phương thẳng đứng! Cũng cần lưu ý rằng các sức mạnh của Người Nhện đã tăng tiến đáng kể từ so với lúc mới có sức mạnh.
• Siêu tốc độ: Tốc độ của anh vượt xa mọi giới hạn bất kỳ vận động viên điền kinh nào. Anh có thể bắt kịp một chiếc xe ôtô đang tăng ga, nhưng dù sao, anh vẫn thích đi lại bằng tơ nhện hơn.
• Sinh lực: Cơ bắp của Người Nhện dường như có thể hoạt động không biết mệt mỏi, do tỷ lệ sản sinh các chất độc sau chuyển hóa năng lượng tại cơ bắp thấp hơn nhiều so với người thường. Anh có thể chiến đấu nhiều giờ liên tục, nín thở đến 8 phút và có thể lâu hơn thế.
• Sự bền bỉ: Cơ thể Người Nhện có khả năng chịu đựng các va chạm, tác động vật lý cực mạnh, rơi từ tòa nhà thấp tầng, hay bị một kẻ có siêu năng lực đánh đều chẳng là gì, anh chỉ cần gồng người lên là cả võ sĩ quyền anh chuyên nghiệp đấm vào cũng phải gãy tay, vì thế anh phải rất cẩn thận không để những người thường yếu ớt tự làm bị thương.Logo thường thấy tượng trưng cho Người Nhện.
• Sự nhanh nhẹn: Người Nhện có sự nhanh nhẹn, thăng bằng, phối hợp nhịp nhàng vượt trội so với người thường. Các thớ cơ và dây chằng của anh dẻo dai gấp hai lần người thường, và còn mạnh gấp nhiều lần. Anh còn có khả năng nhào lộn như một nghệ sĩ thực thụ, trình diễn được tất cả những động tác khó nhất: lật, xoay, đu dây.. Anh có thể phá bất cứ kỷ lục Olympic môn Thể dục dụng cụ nào nếu muốn.
• Giữ thăng bằng: gần như là một bản năng, Người Nhện giữ được thăng bằng hoàn hảo trong bất kỳ tư thế nào, tại bất cứ nơi đâu, dù có nhỏ hẹp thế nào đi nữa. - Phản xạ: Người Nhện phản xạ nhanh gấp 40 lần người thường, kết hợp với linh tính loài nhện, không một đòn tấn công nào chạm được vào anh, kể cả đạn bắn ở một khoảng cách không quá gần, thậm chí có những lúc anh né đạn mà không dùng khả năng linh tính.
• Tốc độ hồi phục: không quá nhanh như Wolverine, nhưng với những vết thương phần mềm, hay cả gãy xương, Người Nhện đã hoàn toàn hồi phục trong vài ngày. Sau khi nhận được sức mạnh, bệnh cận thị của anh cũng tự khỏi. Trong trận đấu với Masked Marauder, anh bị mù hoàn toàn, nhưng chỉ hai ngày sau, anh lại có thể nhìn tốt, mắt còn hơi mẫn cảm một ngày sau là bình thường.
• Khả năng loại trừ độc tố: Sự chuyển hóa trong Người Nhện diễn ra với tốc độ cao, anh đề kháng được liều thuốc và nguồn bệnh tốt hơn nhiều so với người thường. Trong trận đụng độ Swarm, Người Nhện bị hàng ngàn vết ong đốt, nhưng chỉ 24 giờ là bình phục. Khả năng đề kháng với các chất độc khác nhau cũng không giống nhau. Mặc dù dính nọc độc của Ma cà rồng, hay bị Vulture hắt axit vào mắt, anh cũng nhanh chóng bình phục.